作者：翟夷 北京市朝陽區(qū)六里屯社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心(北京城建老年病醫(yī)院)

MTT檢測Ru（II）聚吡啶復(fù)合物對人宮頸癌HeLa細(xì)胞系的細(xì)胞毒性，并與順鉑的結(jié)果進(jìn)行比較。本研究中測試的釕配合物的細(xì)胞毒性也可以通過半抑制濃度值進(jìn)行比較。通過繪制細(xì)胞活力與配合物濃度的關(guān)系，計算出配合物對應(yīng)的半抑制濃度值。這些結(jié)果中，我們可以得出結(jié)論，細(xì)胞活力隨著Ru（II）復(fù)合物濃度的增加而降低。配合物的半抑制濃度值均高于順鉑，說明在相同的條件下，復(fù)合物的細(xì)胞毒性活性低于順鉑。當(dāng)比較半抑制濃度值時，復(fù)合物的細(xì)胞毒活性高于復(fù)合物。根據(jù)研究結(jié)果，我們推測該配合物的抗腫瘤活性可能與該配合物的特定分子形狀、配體的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)有關(guān)。
目前使用的大多數(shù)細(xì)胞毒性抗癌藥物已被證明可誘導(dǎo)敏感細(xì)胞凋亡。不同的制劑與不同的目標(biāo)相互作用，誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，具有一些共同的特征（DNA的核內(nèi)裂解，染色質(zhì)凝結(jié)的變化），這一事實表明，細(xì)胞毒性是由細(xì)胞參與這種所謂的雙程序性^細(xì)胞死亡的能力決定的。Annexin V是一種重組磷脂酰絲氨酸結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸殘基特異性相互作用，可用于檢測細(xì)胞凋亡為確定Annexin V陽性（凋亡）細(xì)胞的百分比，用復(fù)合物處理HeLa細(xì)胞24 h后，用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測。顯示了有無復(fù)合物時HeLa細(xì)胞的代表性直方圖。Annexin V陽性細(xì)胞的百分比（復(fù)雜142.02%，復(fù)雜223.09%，復(fù)雜317.2%，復(fù)雜3和38.3 %復(fù)雜4）顯著增加相比，未經(jīng)處理的細(xì)胞（陰性對照），但當(dāng)這些細(xì)胞與陽性對照（順鉑）相比，有一個明確的相關(guān)性這些復(fù)合物與順鉑的活動.所示這些結(jié)果證實了誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡主要是通過細(xì)胞凋亡發(fā)生的。
采用流式細(xì)胞術(shù)檢測AO（吖啶橙）染色細(xì)胞24 h中合成的釕復(fù)合物對HeLa細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。AO可以區(qū)分靜止細(xì)胞和激活的增殖細(xì)胞，也可以允許多個G1室的差異檢測。用復(fù)合物處理HeLa細(xì)胞的半抑制濃度值24 h后，細(xì)胞DNA分布。釕配合物處理后，G0/G1期細(xì)胞百分比從對照組的12.3 %分別增加到30.7、31.2、30.06和33.1 %。用釕配合物處理HeLa細(xì)胞后，G0/G1期細(xì)胞顯著增強(qiáng)，同時S期細(xì)胞百分比相應(yīng)降低。這些結(jié)果表明，復(fù)合物誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。
分子對接研究我們進(jìn)行了詳細(xì)的分子對接，以進(jìn)一步探索決定結(jié)合親和力的分子因素和釕配合物與人類DNA TOP1的結(jié)合能。拓?fù)洚悩?gòu)酶已經(jīng)被研究為產(chǎn)生新的癌癥治療方法的靶點，因為當(dāng)它們在細(xì)胞中被抑制時，其結(jié)果是細(xì)胞死亡。因此，拓?fù)洚悩?gòu)酶的抑制劑有能力殺死所有正在經(jīng)歷DNA復(fù)制、讀取DNA以產(chǎn)生蛋白質(zhì)或經(jīng)歷DNA損傷修復(fù)的細(xì)胞。由于癌細(xì)胞分裂速度比正常細(xì)胞快得多，癌細(xì)胞會被拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑殺死，盡管一些具有拓?fù)洚悩?gòu)酶活性的正常細(xì)胞也會被殺死。DNA TOP1在腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)，是癌癥化療中的一個重要靶點。釕配合物被連接到TOP1的活性位點口袋中，在發(fā)現(xiàn)工作室中使用LibDock模塊。其中，復(fù)合物的dock得分最高，為144.097千卡/mol。DNA堿基對和蛋白質(zhì)氨基酸的活性位點口袋殘基涉及與配合物的氫鍵形成。因此，這些殘基在底物結(jié)合中發(fā)揮著重要的作用，從而產(chǎn)生對釕配合物的代謝活性。釕配合物的氫鍵和Dock分?jǐn)?shù)。得分越高，表明受體與配體的結(jié)合親和力越強(qiáng)。對接結(jié)果表明，受體-配體復(fù)合物通過氫鍵和疏水相互作用來穩(wěn)定。
結(jié)論合成了釕聚吡啶配合物并進(jìn)行了表征。DNA相互作用已通過光譜方法和粘度測量進(jìn)行。綜上所述，釕聚吡啶配合物通過插入方式與DNA相互作用。所有合成的配合物都與BSA相互作用較強(qiáng)。通過分子對接模擬了四種釕配合物與DNA TOP1的相互作用，在基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計中發(fā)揮了重要作用，這些結(jié)果表明合成的配合物與TOP1的核苷酸和氨基酸相互作用。在輻照條件下，釕配合物可以裂解pBR322的DNA，這表明單線態(tài)氧負(fù)責(zé)pBR322的DNA的裂解。抗菌和抗氧化活性分析表明，與其他復(fù)合物相比，復(fù)合物對所有測試微生物的活性都更高，而復(fù)合物的抗菌活性都是中等的，。合成的釕聚吡啶配合物對HeLa細(xì)胞均具有體外抗癌活性，表明復(fù)合物具有較高的細(xì)胞毒性。